亚洲国产午夜精彩无码福利,亚洲综合色在线一区二区,欧美大片黄精品一区二区,亚洲综合在线成人一区

在間接法和夾心法ELSIA中，陽性孔呈色深于陰性孔。在競賽法ELISA中則相反，陰性孔呈色深于陽性孔。兩類反響的成果判別辦法不一樣，分述于下。
（1）間接法和夾心法
這類反響的定性成果能夠用肉眼判別。目視標本也無色或近于無色者判為陰性，顯色明晰者為陽性。但在ELSIA中，正常人血清反響后?？沙尸F(xiàn)呈色的本底，此本底的深淺因試劑的構(gòu)成和試驗的條件不一樣而異，因而試驗中有必要加測陰性對照。陰性對照的構(gòu)成應(yīng)為不含受檢物的正常血清或類似物。在用肉眼判別成果時，更宜用顯色深于陰性對照作為標本陽性的目標。
目視法簡捷明晰，但頗具主觀性。在條件許可下，應(yīng)該用比色計測定吸光值，這么能夠得到客觀的數(shù)據(jù)。先讀出標本（sample，S）、陽性對照（P）、和陰性對照（N）的吸光值，然后進行核算。核算辦法有多種，大致可分為陽性斷定值法和標本與陰性對照比值法兩類。
a．陽性斷定值
陽性斷定值（cut-off value）通常為陰性對照A值加上一個特定的常數(shù)，以此作為判別成果陽性或陰性的規(guī)范。
ELISA試劑盒用此法判別成果請求試驗條件十分穩(wěn)定，試劑的制備有必要規(guī)范化，陽性和陰性的對照品應(yīng)契合必定的規(guī)范，須配用精密的儀器，并嚴厲按規(guī)則操作。陽性斷定值公式中的常數(shù)是在這特定的體系中經(jīng)過對很多標本的試驗查看而得到的?，F(xiàn)舉某種查看HBsAg的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對照品為不含HBsAg的復(fù)鈣人血漿，陽性對照品HBsAg的含量標明為P=9±2ng /ml。每次試驗設(shè)2個陽性對照和3個陰性對照。測得A值后，先核算陰性對照A值的平均數(shù)（NC X ）和陽性對照A值的平均數(shù)（PCX），兩個平均數(shù)的差（P-N）有必要大于一個特定的數(shù)值（例0.400），試驗才有用。3個陰性對照A值均應(yīng)≥0.5×NCX，并≤1.5×NCX，如其間之一超出此規(guī)模，則棄去，而以另兩個陰性對照從頭核算NCX；如有兩個陰性對照A值超出以上規(guī)模，則該次試驗無效。陽性斷定值按下式核算：
陽性斷定值=NCX+0.05
標本A值＞陽性斷定值的為陽性，小于陽性斷定值的為陰性。應(yīng)留意的是，式中0.05為該試劑盒的常數(shù)，只適合于該特定條件下，而不是對各種試劑均可通用。
依據(jù)以上敘說能夠看出，在這種辦法中陰性對照和陽性對照也起到試驗的質(zhì)控效果，試劑蛻變和操作不妥均會發(fā)作"試驗無效"的后果。
b.標本/陰性對照比值
在試驗條件（包含試劑）較難確保穩(wěn)定的情況下，這種判別法較為適宜。在得出標本（S）和陰性對照（N）的A值后，核算S/N值。也有寫作P/N的，這兒的P不代表陽性(positive)，而是患者（patient）的縮寫，不該誤解。為防止混雜，更宜用S/N表明。在早期的間接法ELISA中，有些作者定出S/N為陽性規(guī)范，現(xiàn)多為各種測定所沿襲。實際上每一測定體系應(yīng)該用試驗求出各自的S/N的閾值。更應(yīng)留意的是，N所代表的陰性對照是不含受檢物質(zhì)的人血清。有的試劑盒中所設(shè)陰性對照為不含蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)含量較底的緩沖液，致使反響后發(fā)作的本底也許較正常人血清的本底低得多。因而，這類試劑盒規(guī)，如N<0.05<>（或別的數(shù)值），則按0.05核算，否則將呈現(xiàn)假陽性成果。
（2）競賽法
在競賽法ELISA中，陰性孔呈色深于陽性孔。陰性呈色的強度取決于反響中酶物的濃度和參加競賽按捺物的量，通常調(diào)理陰性對照的吸光度在1.0-1.5之間，此刻反響zui為靈敏。
競賽法ELISA不易用自視判別成果，因肉眼很難區(qū)分弱陽性反響與陰性對照的顯色區(qū)別，通常均用比色計測定，讀出S、P和N的吸光值。核算辦法首要也有兩種，即陽性斷定值法和按捺率法。
a. 陽性斷定值法
與間接法和夾心法中的陽性斷定值法根本一樣，但在核算公式中引進陽性對照A值，現(xiàn)舉某種查看抗HBc的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對照為不含抗HBc的復(fù)鈣人血漿，陽性對照中抗HBc含量為125±1 00u/ml。每次試驗設(shè)2個陽性對照和3個陰性對照。測得A值后，先核算陰性對照A值的平均值（NC X ）和陽性對照A值的平均數(shù)（PCX），兩個平均數(shù)的差（N-P）有必要大于一個特定的數(shù)值（例如0.300）,試驗才有用。3個陰性對照A值均應(yīng)小于2.000，并且應(yīng)≥0.5×NCX并≤1.5×NCX，如其間之一超出此規(guī)模，則棄去，而以另2個陰性對照從頭核算×NCX；如有2個陰性對照A超出以上規(guī)模，則該次試驗無效。陽性斷定值按下式核算：
陰性斷定值=0.4×NCX+0.6×PCX
標本A值≤陽性斷定值的反響為陽性，A＞陽性斷定值的反響為陰性。
b. 按捺率法
按捺率表明標本在競賽中標本對陰性反響顯色的按捺程度，按下式核算：
按捺率（%）= （陰性對照A值-標本A值）×100%/陰性對照A值
通常規(guī)則按捺率≥50%為陽性，＜50%為陰性。
定量測定
ELISA試劑盒操作進程復(fù)雜，影響反響要素較多，特別是固相載體的包被難到達各個別之間的共同，因而在定量測定中，每批測驗均須用一系列不一樣濃度的參閱規(guī)范品在一樣的條件下制造規(guī)范曲線。測定大分子量物質(zhì)的夾心法ELISA，規(guī)范曲線的規(guī)模通常較寬，曲線zui高點的吸光度可接近2.0，制作時常用半對數(shù)紙，以查看物的濃度為橫坐標，以吸光度為縱坐標，將各濃度的值逐點連接，所得曲線通常呈S形，其頭、尾部曲線趨于平整，中心較呈直線的有些是的查看區(qū)域。
測定小分子量物質(zhì)常用競賽法，其規(guī)范曲線中吸光度與受檢物質(zhì)的濃度呈負相關(guān)。規(guī)范曲線的形狀因試劑盒所用形式的不同而略有不一樣。